Ekspresija nukleozidnih transportera u primarnoj kulturi astrocita pacova

Abstract

Mnoge ćelije u CNS-u preuzimaju nukleozide iz vanćelijske teĉnosti i koriste ih za sintezu nukleotida u putevima uštede. Nukleozidi se kroz membranu astrocita transportuje putem dve genske familije nukleozidnih transportera: ekvilibrativnih (ENT1 i ENT2) koji omogućavaju jednosmernu olakšanu difuziju i koncentrativnih (CNT2) koji omogućavaju jednosmerni sekundarno aktivni transport kroz ćelijsku membranu. Cilj ovog istraţivanja je bio ispitivanje ekspresije razliĉitih klasa nukleozidnih transportera na primarno kultivisanim astrocitima pacova, kao i uticaj hroniĉno povećane koncentracije adenozina u vanćelijskom medijumu na stepen njihove ekspresije. Eksperimenti su raĊeni u primarnoj kulturi astrocita pacova soja Wistar. Ćelije su u toku 21 dana kontinuirano tretirane adenozinom u koncentracijama od 25µM i 100µM. Kvantifikacija genske ekspresije je vršena RT-qPCR analizom na svakih 7 dana i izraţena je kao ΔCt vrednost u odmosu na vrednost koamplifikovanog β-aktina. Rezultati su pokazali da se u primarnim astrocitima pacova eksprimiraju transporteri i ekvilibrativnog i koncentrativnog tipa. Najveću ekspresiju nakon 7-og dana u kulturi je pokazao koncentrativni transporter CNT 2 (ΔCt=7,13±0,42), dok je stepen ekspresije za ekvilibrativne transportere bio nešto niţi za ENT 1 ΔCt=9,48±0,29, a za ENT 2 ΔCt=8,67±0,24. TakoĊe je uoĉeno da se tokom kultivisanja u vremenskom periodu od 21-og dana postepeno smanjuje genska ekspresija svih ispitivanih transportera: za CNT 2 ΔCt=12,75±0,51; za ENT 1 ΔCt=12,78±0,41; i za ENT 2 ΔCt=12,37±0,44. U uslovima kontinuiranog prisustva adenozina u primarnoj kulturi astrocita (25µM, odnosno 100µM) nakon 7,14 i 21 dana, nije došlo do znaĉajne promene u ekpresiji ni jednog od ispitivanih transportera u odnosnu na populaciju ćelija koja nije bila izloţena tretmanu adenozinom.